Як ви виділяєте ДНК Bacmid?
Бакміда, по суті, є дуже великою плазмідою, що містить геном бакуловірусу, модифікований для перенесення гена lacZ, і док-сайт attTn7, вставлений у область кодування lacZ. Хелперна плазміда експресує транспозазу Tn7.
3.1. 1 Препарат бакмідної ДНК
- Змішайте 10 нг ДНК з 50 мкл DH10Bac E. …
- Інкубуйте на льоду протягом 30 хв.
- Тепловий удар при 42 °C протягом 45 с.
- Інкубуйте на льоду протягом 2 хв.
- Додайте 400 мкл середовища SOC у пробірку.
- Відновіть клітини в струшуючому інкубаторі при 37 °C протягом 4 годин.
- Помістіть 200 мкл клітин на бакмідну пластину.
- Інкубуйте при 37 °C протягом 48 годин.
Технологія бакміду базується на включенні компонентів системи Tn7 у плазміду для перенесення, що містить інтеграційний сигнал Tn7, з подальшим використанням допоміжної плазміди з функціями транспозази та бакміди, яка містить специфічну цільову послідовність Tn7 у геномі бакуловірусу, як цілеспрямований…
Штам-господар E. coli, DH10Bac™, який містить човниковий вектор бакуловірусу (бакміду) і допоміжну плазміду, і дозволяє генерувати рекомбінантний бакмід після транспонування експресійної конструкції pFastBac™.
Є п'ять основних класів:
- F-плазміди фертильності, які містять гени tra. …
- Плазміди резистентності (R), які містять гени, що забезпечують стійкість до антибіотиків або антибактеріальних засобів. …
- Col плазміди, які містять гени, що кодують бактеріоцини, білки, які можуть вбивати інші бактерії.